Hva er egentlig hensikten med å lysere cellene? De "kompliserte" løsningene inkluderer, som du sier, en haug med ingredienser. Vaskemidlet er stort sett til stede for å oppløse cellemembraner (som er lipidbaserte) og tillate ekstraksjon av proteiner eller andre biokjemikalier fra cellen (og organeller i eukaryoter). Det finnes også to typer vaskemidler: ionisk og anionisk. Begge vaskemiddeltypene vil oppløse membraner, men ioniske vaskemidler har en tendens til å være tøffere av de to ved å forstyrre proteinstrukturene sterkt. som nedbryter proteiner. Det er mange av disse, men noen eksempler inkluderer PMSF, EDTA, aprotinin, etc.

Noen ganger er det nødvendig å buffer pH i lysisløsning for å overvåke proteinkomplekser, eller holde et protein naturt, eller holde DNA i et optimalt pH-område. Generelle løsninger for lysebuffere inkluderer Tris-EDTA (TE), PBS, etc. Dette valget kommer ned på om du vil ha en buffer, og i hvilket pH-område du ønsker å beholde lysisløsningen. Vanlige buffere som TE og PBS består av et pH-område på mellom 7-8. Det er andre buffere som brukes i lave pH-områder (pH 4-6), men er vanligvis mindre vanlige.

Til slutt er det måter å lysere celler uten å bruke noen form for lysebuffer. En metode er å bruke sonikering, som bruker rettet pulser av høyfrekvent lyd for å lysere celler ved å skjære dem mekanisk. En annen metode er å fryse tine celler gjentatte ganger fra -80 ° C til 4 ° C (vanligvis er det tre ganger tilstrekkelig). Lyse på denne måten oppnås ved gjentatt dannelse av iskrystaller som skjærer opp celler og frigjør innholdet.

Hvis du har et mer spesifikt spørsmål, kan en av oss veilede deg videre, men dette gir en generell oversikt av hva som er involvert i cellelyse-buffere.

Jeg lurer på hvordan du planlegger å måle lysis? Du vil finne at mange lyseringsmetoder for E. coli innlemme en behandling med lysozym og EDTA. Dette er slik at lipopolysakkarid (ytre membran) og peptidoglykanlag i cellehylsen kan brytes før vaskemiddel (vanligvis SDS eller Triton X-100) tilsettes for å oppløse den indre eller cytoplasmiske membranen. Jeg mistenker at hvis du tilsatte vaskemiddel til intakte celler, ville det ikke være spesielt effektivt, og eventuelle celler som ble berørt ville forbli som denaturerte celler, som for eksempel fortsatt vil bidra til optisk tetthet.

Siden de er vanligvis i stand til å motstå gallsalt i tynntarmen, kan gramnegative bakterier være ganske motstandsdyktige mot vaskemidler. For eksempel kan mange Enterobacteriaciae vokse i 5% SDS - se:

Rajagopal, S et al . (2003) Åtte gramnegative bakterier er 10 000 ganger mer følsomme for kationiske vaskemidler enn for anioniske vaskemidler. Canad. J. Mic. 49: 775-779