Etter min erfaring har ikke elueringsbufferen noen betydning (både for E.coli og Mycobacteria). Jeg har hørt dette før fra kolleger, men det er vanligvis basert på overtro eller anekdotiske bevis. Jeg har sammenlignet vann / EB-eluering og har aldri sett noen forskjell i gnisting (faktisk får jeg vanligvis litt flere kolonier med EB).

Når jeg får lysbuer (gnister), er det vanligvis fordi jeg ikke vasker nok, har bobler eller må ha mange bakterier. Bue er en kollaps av motstand.

Gnisting oppstår fra å ha for mange salter eller mulig ikke nok løsning. Etter å ha finjustert elektroporering for veldig store mengder DNA (16+ ug), har jeg funnet å hjelpe:

• Forsikre deg om at du bruker riktig mengde væskeoppløsning til å transformere. For lite vil ende opp med å gnist
• Rydd opp i DNA-et. Jeg vasker med dobbelt så mye som anbefalt buffer PE, men jeg har ikke gode bevis på hvor mye den andre PE-vasken hjelper
• Eluer DNA-rensingen din med vann
• Slipp dialyser DNA. Dette er trolig det viktigste trinnet for å forhindre lysbue